1-  هدف :

شناسايي ميكروارگانيسم هايي كه قادرند در مسير تخمير گلوكز از اسيد پيروويك، توليد استوئين ( استيل متيل كربونيل ) نمايند.

2-  اساس آزمايش :

اسيد پيروويك حاصل از تخمير گلوكز ، از چندين راه متابوليكي ممكن است توسط باکتريها هيدروليز گردد.

باكتري هايي مانند كلبسيلا، انتروباكتر و سراشيا مي توانند توليد استوئين نمايند، در حضور اكسيژن هوا و هيدروكسيد پتاسيم 40% استوئين به دي استيل تبديل می شود و آلفا نفتول به عنوان يك كاتاليزور عمل نموده و توليد رنگ قرمز مي نمايد.

3- نمونه اوليه :

كشت تازه ميكروبي ( كشت خالص 24-18 ساعته )

4-  مواد و معرفها :

-       محيط MR/VP

-       معرفها :    

الف) آلفا نفتول 5gr  در اتيل الكل خالص 100ml

ب‌) هيدروكسيد پتاسيم 40% در آب مقطر 100ml

4-  روش انجام كار  :

يك لوله درپيچ دار حاوي  2.5ml ،MR/VP Broth   را توسط كشت خالص باكتري مورد نظر تلقيح میکنیم و مدت  48-24 ساعت در اتوو 35⁰ C قرار مي دهيم. سپس يك قطره آلفا نفتول 5% و دو قطره KOH 40%  به آن اضافه مي نماييم. لوله را به آرامي تكان داده و آن را به طور ثابت به مدت 15-10 دقيقه قرار مي دهيم. ايجاد واكنش و توليد رنگ قرمز در مدت 15 دقيقه يا بيشتر نشانگر وجود دي استيل و مثبت بودن تست VP مي باشد. رنگ زرد يا عدم واکنش نشانگر منفي بودن تست VP است.

اين آزمايش نبايد بيش از يك ساعت بعد از ريختن معرف ها خوانده شود زيرا مي تواند نتيجه مثبت كاذب دهد.

5-  برنامه  QC :

سوش كنترل مثبت:   انتروباكتر آئروژينوزا ،   كلبسيلا پنومونيه

سوش كنترل منفي:E coli ATCC 25922