طرز تهيه كلي محيط هاي كشت
دسته بندی : باکتری شناسی پزشکی, میکروبشناسی عمومی,
همانطوري
كه مي دانيد محيطهاي كشت به سه دسته جامد، نيمه جامد، مايع تقسيم مي شوند.
محيطهاي مايع معمولا فاقد آگار هستند يا مقدار آگارشان بسيار كم است.
مثلاً حدود (2/0%) و محيط هاي نيمه جامد داراي مقدار كمي آگار حدود 3-2 گرم و بالاخره محيط هاي جامد كه داراي 15-13 گرم آگار در ليتر محيط هستند.
براي
ساختن محيط هاي كشت باكتري، از پودر مخصوص كه در شيشه هاي مربوطه قرار
دارد، استفاده مي شود. در روي اين شيشه ها تركيب محيط بطور كامل و همچنين
طرز ساخت آن نوشته شده است. مثلا براي ساختن نوترينت آگار ابتدا مقدار لازم
از پودر آن را وزن كرده ودر مقدار معيني آب مقطر كه قبلا در يك ارلن ماير
يا بطري ريخته شده اضافه نموده و آنرا كاملا حل می کنند وسپس با پنبه درب
ارلن ماير را مسدود كرده و آن را روي سه پايه چراغ گازي حرارت ميدهند، تا
زمان جوشيدن آنرا چند بار تكان دهيد تا خوب حل شود و به مدت يك دقيقه
بجوشد.
پس از آنكه مايع بجوش آمد، آنرا برداشته و با تكه كاغذ آلومينيومي روي پنبه را پوشانده و ظرف را در اتوكلاو ميگذارند تا در فشار 15 پوند بر اينچ مربع و حرارت 121 درجه سانتيگراد به مدت 15 دقيقه استريل شود. بعد از استريل كردن تا حدود ۴۰ تا ۴۵ درجه سانتیگراد باید خنک شود، سپس در حاليكه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ كنار شعله خارج كردهايد، دهانه ارلن را يكبار از درون شعله گاز عبور دهيد و بعد درون پليت هاي استريل شده بين ۱۵ تا ۲۰ میلی لیتر از محلول بريزيد. بعد پليت ها را در كناري بگذاريد تا سرد شوند و از تكان دادن آن خودداري نمائيد و پس از جامد شدن محيطهاي كشت نوترينت آگار را جمع كرده ودر ۳۷ درجه سانتیگراد بمدت 24 ساعت قرار دهيد. اگر محيط ها آلوده نشده باشند آنها را از ۳۷ درجه بيرون آورده و در يخچال 4 درجه سانتي گراد قرار ميدهند.
پس از آنكه مايع بجوش آمد، آنرا برداشته و با تكه كاغذ آلومينيومي روي پنبه را پوشانده و ظرف را در اتوكلاو ميگذارند تا در فشار 15 پوند بر اينچ مربع و حرارت 121 درجه سانتيگراد به مدت 15 دقيقه استريل شود. بعد از استريل كردن تا حدود ۴۰ تا ۴۵ درجه سانتیگراد باید خنک شود، سپس در حاليكه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ كنار شعله خارج كردهايد، دهانه ارلن را يكبار از درون شعله گاز عبور دهيد و بعد درون پليت هاي استريل شده بين ۱۵ تا ۲۰ میلی لیتر از محلول بريزيد. بعد پليت ها را در كناري بگذاريد تا سرد شوند و از تكان دادن آن خودداري نمائيد و پس از جامد شدن محيطهاي كشت نوترينت آگار را جمع كرده ودر ۳۷ درجه سانتیگراد بمدت 24 ساعت قرار دهيد. اگر محيط ها آلوده نشده باشند آنها را از ۳۷ درجه بيرون آورده و در يخچال 4 درجه سانتي گراد قرار ميدهند.
طرز ساختن
ساير محيطهاي كشت، همينطور ميباشد منتهي بعضي از محيطهاي جامد در لوله
مستقيم، پس از جوشاندن ريخته شده و بعد استريل ميشوند كه اين محيطها را پس
از استريل شدن، به طور ايستاده ميگذاريم مثل محيط SIM و يا كج ميگذاريم مثل محيط TSI تا سرد شوند.
براي
ساختن محيط مايع (براث) پس از جوشاندن، محيط را در لوله ها تقسيم ميكنيم
و سپس با پنبه اي درب آنها را مسدود كرده و جهت استريل داخل اتوكلاو قرار
ميدهيم.
برچسبها : طرز تهيه كلي محيط هاي كشت,محيط هاي كشت,جامد,نيمه جامد,مايع,نوترينت آگار,محيط SIM,محيط TSI,براث,اتوكلاو,www.glsg.ir,glsg.ir,glsg,احسان باقری,دانشگاه آزاد گرگان,علوم آزمایشگاهی دانشگاه آزاد گرگان
